Uso de una PCR anidada para el diagnóstico del virus de la necrosis pancreática infecciosa (VNPI) en truchas de campo

Autores/as

  • Catalina Tufiño-Loza Universidad Nacional Autónoma de México. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Ciudad de México, México.
  • José Juan Martínez-Maya Universidad Nacional Autónoma de México. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Ciudad de México, México.
  • Amaury Carrillo-González Universidad del Valle de México, Campus Toluca, Estado de México, México.
  • Diana Neria-Arriaga SENASICA, Ciudad de México, México.
  • Celene Salgado-Miranda Universidad Autónoma del Estado de México. Centro de Investigación y Estudios Avanzados en Salud Animal, Estado de México, México.
  • Edith Rojas-Anaya INIFAP. Centro Nacional de Investigaciones Disciplinarias en Salud Animal e Inocuidad. Carretera México-Toluca km 15.5, Colonia Palo Alto, Ciudad de México, México.
  • Elizabeth Loza-Rubio INIFAP. Centro Nacional de Investigaciones Disciplinarias en Salud Animal e Inocuidad. Carretera México-Toluca km 15.5, Colonia Palo Alto, Ciudad de México, México.

DOI:

https://doi.org/10.22319/rmcp.v11i3.5242

Palabras clave:

VNPI, PCR anidada, trucha arcoíris, diagnóstico

Resumen

El aislamiento en cultivo celular es el método principal para el diagnóstico del virus de la necrosis pancreática infecciosa (VNPI). Aunque es un método confiable, resulta costoso y conlleva tres semanas en proporcionar un resultado. Para disminuir el tiempo en el diagnóstico y aumentar la sensibilidad para la detección del VNPI, el objetivo del presente estudio fue establecer y evaluar el uso de una PCR anidada (PCRa) para un diagnóstico rápido del VNPI. Para ello, se diseñaron dos pares de iniciadores basados en secuencias mexicanas. El primer par (RT-PCR) amplificó un producto de 682 pb y el segundo par (PCRa) 229 pb del gen VP2. Posteriormente, se infectaron 70 crías de truchas arcoíris (Oncorhynchus mykiss) con la cepa virulenta MEX3-CSM-05 a una dosis de 1X105.8 DICC50%/0.02 ml. De cada organismo se colectó el riñón, el bazo, los sacos pilóricos, el hígado, el intestino y las branquias. Para evaluar las pruebas, se utilizaron 26 truchas adultas clínicamente sanas de granjas comerciales del Estado de México. La frecuencia de detección del VNPI mediante RT-PCR en las branquias fue de 87.1 %, en el hígado 61.4 %, en los sacos pilóricos 61.4 %, en el riñón 58.6%, en el intestino 35.7 % y en el bazo 32.9 % (P<0.05). Las muestras negativas a la RT-PCR resultaron positivas en la PCRa. Asimismo, se mostraron positivas las muestras de los órganos de las truchas de campo. En conclusión, la RT-PCR tuvo menor sensibilidad que la PCRa, la cual mostró una sensibilidad del 100%. Por lo tanto, la PCRa es mejor para un diagnóstico confiable del VNPI en peces infectados y enfermos.

Descargas

Los datos de descargas todavía no están disponibles.

Citas

Rodríguez SJS, Borrego JJ, Perez PSI. Infectious pancreatic necrosis virus: biology, pathogenesis, and diagnostic methods. Adv Virus Res 2003;62(1):113-165.

Salgado-Miranda C. Necrosis pancreática infecciosa: enfermedad emergente en la truticultura de México. Vet Méx 2006;37(4):467-477.

Dobos P, Roberts TE. The molecular biology of infectious pancreatic necrosis virus: a review. Can J Microbiol 1983;29(4):377-384.

King AMQ, Adams MJ, Carstens EB, Lefkowitz EJ, King AMQ, et al, editors. Virus taxonomy: ninth report of the International Committee on Taxonomy of Viruses. New York, USA: Academic Press; 2012:499-507.

Dobos P. Birnaviruses. Encyclopedia of life sciences. Nature Publishing Group 2001, London.

Dhar A, LaPatra S, Orry A, Allnutt T. Infectious pancreatic necrosis virus. In: Woo PTK, Cipriano RC editors. Fish viruses and bacteria: Pathobiology and protection. 1rst ed. Wallingford, Oxfordshire, UK: CAB International; 2017: 1-12.

OIE. Manual of diagnostic tests for aquatic animals. 5th ed. Paris, France: World Organization for Animal Health. 2006.

Munro ES, Midtlyng PJ. Infectious pancreatic necrosis and associated aquatic birnaviruses. In: Woo PT, Bruno DW, editors. Fish diseases and disorders. Volume 3: viral, bacterial and fungal infections, 2nd ed. Oxfordshire, UK: CABI; 2011:1-65.

Ortega SC, Montes de Oca R, Groman D, Yason C, Nicholson B, Blake S. Case report: viral infectious pancreatic necrosis in farmed Rainbow Trout from Mexico. J Aquat Anim Health 2002;14(4):305-310.

Salgado MC. Virulencia del virus de la necrosis pancreática infecciosa en trucha arcoíris (Oncorhynchus mykiss) a partir de aislamientos mexicanos [tesis doctorado]. México, DF: Universidad Nacional Autónoma de México; 2014.

Amos KH. Procedures for the detection and identification of certain fish pathogens, 3rd ed. Fish Health Section, American Fisheries Society, Corvallis; 1985.

Ahne W, Thomsen I. 1986. Infectious pancreatic necrosis: detection of virus and antibodies in rainbow trout IPNV-carrier (Salmo gairdneri). J Vet Med 1986;33(7):552-554.

Milne SA, Galachacher S, Cash P, Porter AJR. A reliable RTPCR-ELISA method for the detection of infectious pancreatic necrosis virus (IPNV) in farmed rainbow trout. J Virol Methods 2006;132(1-2):92-96.

Sanz F, Coll J. Techniques for diagnosing viral diseases of salmonid fish. Dis Aquat Org 1992;13:211-223.

LaPatra SE. The use of serological techniques for virus surveillance and certification of finfish. Annu Rev Fish Dis 1997;6:1-28.

Way-Shyan W, Yea-Ling W, Jainn-Shyan L. Single-tube, non-interrupted reverse transcription PCR for detection of IPNV. Dis Aquat Org 1997;28(3):229-233.

Pryde A, Melvin WT, Munro ALS. Nucleotide sequence analysis of the serotype-specific epitope of infectious pancreatic necrosis virus. Arch Virol 1993;129(1-4):287-293.

Lopez-Lastra M, Gonzalez M, Jashes M, Sandino AM. A detection method for infectious pancreatic necrosis virus (IPNV) based on reverse transcription (RT)-polymerase chain-reaction (PCR). J Fish Dis 1994;17(3):269-282.

Blake S, Lee MK, Singer J, McAllister PE, Nicholson BL. Detection and identification of aquatic birnavirus by polymerase chain reaction assay. J Clin Microbiol 1995;33(4):835-839.

Alonso M, Rodríguez S, Pérez-Prieto SI. Viral coinfection in salmonids: infectious pancreatic necrosis virus interferes with infectious hematopoietic necrosis virus. Arch Virol 1999;144(4):657-673.

Rodriguez SJ, Borrego JJ, Perez-Prieto SI. Comparative evaluation of five serological methods and RT-PCR assay for the detection of IPNV in fish. J Virol Methods 2001;97(1-2):23-31.

Bowers RM, Lapatra SE, Dhar AK. Detection and quantitation of infectious pancreatic necrosis virus by real-time reverse transcriptase-polymerase chain reaction using lethal and non-lethal tissue sampling. J Virol Methods 2008;147(2):226-34.

Barrera-Mejía M, Simón-Martínez J, Salgado-Miranda C, Vega F, Ortega C, Aragón A. Development and validation of a short-time cell culture and multiplex reverse transcriptase polymerase chain reaction assay for infectious pancreatic necrosis virus in Mexican farm-sampled rainbow trout. J Aquat Anim Health 2009;21(3):167-72.

Tapia D, Eissler Y, Torres P, Jorquera E, Espinoza JC, Kuznar J. Detection and phylogenetic analysis of infectious pancreatic necrosis virus in Chile. Dis Aquat Org 2015;116(3):173-84.

Salgado-Miranda C, Rojas-Anaya E, García-Espinoza G, Loza-Rubio E. Molecular characterization of the VP2 gene of Infectious Pancreatic Necrosis Virus (IPNV) isolates from Mexico. J Aquat Anim Health 2014;26(1):43-51.

Dorson M, Touchy C. The influence of fish age and water temperature on mortalities of rainbow trout, Salmo gairdneri Richardson, caused by a European strain of infectious pancreatic necrosis virus. J Fish Dis 1981;4(3):213–221.

de las Heras A, Perez-Prieto S, Rodríguez Saint-Jean S. In vitro and in vivo immune responses induced by a DNA vaccine encoding the VP2 gene of the infectious pancreatic necrosis virus. Fish Shellfish Immunol 2009;27(2):120-129.

Ingerslev HC, Fausa EP, Jakobsen RA, Petersen CB, Wergeland HI. Expression profiling and validation of reference gene candidates in immune relevant tissues and cells from Atlantic salmon (Salmo salar L.). Mol Immunology 2006;43(8):1194-1201.

Zar JH. Biostatistical analysis. 5th ed. New Jersey, USA: Prentice Hall; 2010.

Wolf K. Fish viruses and fish viral diseases. Ithaca, New York: Cornell University Press; 1988.

Smail DA, Bain N, Bruno DW, King JA, Thompson F, Pendrey DJ, Morrice S, Cunningham CO. Infectious pancreatic necrosis virus in Atlantic Salmon, Salmo salar L., post-smolts in the Shetland Isles, Scotland: virus identification, histopathology, immunohistochemistry and genetic comparison with Scottish mainland isolates. J Fish Dis 2006;29(1):31–41.

Ortega C, Valladares B, Arguedas D, Vega F, Montes de Oca R, Murray A. Distribution of infectious pancreatic necrosis virus (IPNV) based on surveillance programs in freshwater trout farms of Mexico. J Aquat Anim Health 2016;28(1):21-26.

Barrera-Mejía M, Martínez S, Ortega C, Ulloa-Arvizu R. Genotyping of infectious pancreatic necrosis virus isolates from Mexico state. J Aquat Anim Health 2011;23(4):200-206.

Alonso MC, Cano I, Castro D, Perez-Prieto SI, Borrego JJ. Development of an in situ hybridization procedure for the detection of sole Aquabirnavirus in infected fish cell cultures. J Virol Meth 2004;116(2):133-138.

Akhlagi M, Hosseini A. First report on the detection of infectious pancreatic necrosis virus (IPNV) by RT-PCR in rainbow trout fry cultured in Iran. Bull Eur Ass Fish Pathol 2007;27(5):205-210.

Taksdal T, Ramstad A, Stangeland K, Dannevig BH. Induction of infectious pancreatic necrosis (IPN) in covertly infected Atlantic salmon Salmo salar L. post-smolts by stress exposure, by injection of IPN virus (IPNV) and by cohabitation. J Fish Dis 1998;21(3):193-204.

Suzuki S, Hosono N, Kusuda R. Detection of aquatic birnavirus gene from marine fish using a combination of reverse transcription and nested PCR. Mar Biotechnol 1997;5(4):205-209.

Taksdal T, Dannevig BH, Rimstad E. Detection of infectious pancreatic necrosis (IPN)-virus in experimentally infected Atlantic salmon parr by RT-PCR and cell culture isolation. Bull Eur Ass Fish Pathol 2001;21(5):214-219.

Ørpetveit I, Mikalsen AB, Sindre H, Evensen Ø, Dannevig BH, Midtlyng PJ. Detection of infectious pancreatic necrosis virus in subclinically infected Atlantic salmon by virus isolation in cell culture or real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction: influence of sample preservation and storage. J Vet Diagn Invest 2010;22(6):886-895.

Gahlawat SK, Munro ES, Ellis AE. A non-destructive test for the detection of IPNV carriers in Atlantic halibut Hippoglossus hippoglossus (L.). J Fish Dis 2004;27(4):233-239.

Rimstad E, Hornes E, Olsvik O, Hyllseth B. Identification of a double-stranded RNA virus by using polymerase chain reaction and magnetic separation of the synthesized DNA segments. J Clin Microbiol 1990;28(10):2275-2278.

Soliman H, Midtlyng PJ, El-Matbouli M. Sensitive and rapid detection of infectious pancreatic necrosis virus by reverse transcription loop mediated isothermal amplification. J Virol Methods 2009;158(1-2):77-83.

Imajoh M, Hirayama T, Oshima S. Frequent occurrence of apoptosis is not associated with pathogenic infectious pancreatic necrosis virus (IPNV) during persistent infection. Fish Shellfish Immunol 2005;18(2):163-177.

Santi N, Sandtrø A, Sindre H, Song H, Hong JR et al. Infectious pancreatic necrosis virus induces apoptosis in vitro and in vivo independent of VP5 expression. Virology 2005;342(1):13-25.

Shankar KM, Yamamoto T. Prevalence and pathogenicity of infectious pancreatic necrosis virus (IPNV) associated with feral lake trout, Salvelinus namaycush (Walbaum). J Fish Dis 1994;17(5):461-471.

Publicado

21.09.2020

Cómo citar

Tufiño-Loza C., Martínez-Maya J. J., Carrillo-González A., Neria-Arriaga, D., Salgado-Miranda, C., Rojas-Anaya, E., & Loza-Rubio, E. (2020). Uso de una PCR anidada para el diagnóstico del virus de la necrosis pancreática infecciosa (VNPI) en truchas de campo. Revista Mexicana De Ciencias Pecuarias, 11(3), 811–827. https://doi.org/10.22319/rmcp.v11i3.5242
Metrics
Vistas/Descargas
  • Resumen
    1334
  • PDF
    680
  • PDF
    300
  • Texto completo
    166

Número

Sección

Artículos

Métrica

Artículos similares

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 > >> 

También puede Iniciar una búsqueda de similitud avanzada para este artículo.

Artículos más leídos del mismo autor/a